《中国生物制品规程》冻干人凝血因子Ⅷ浓制剂制造及检定规程·

本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的新鲜血浆分离、提纯、冻干并经病毒灭活制成。主要成份为人凝血因子Ⅷ及少量纤维蛋白原，含适量枸橼酸钠，不含防腐剂。本品对缺秒人凝血因子Ⅷ所致的凝血机能缺陷具有纠正作用，专供防治甲型血友病患者的出血症状。

1 制造

1.1制造要求

1.1.1 对血浆的要求

1.1.1.1所用之血浆来源应符合《原料血浆采集（单采血浆术）规程》要求，血浆应无凝块、无纤维蛋白析出，非脂血，无溶血。在采集时应减少皮肤损伤，保持血流通畅，并与抗凝剂充分混合，用塑料袋采集。新鲜分离液体血浆或新鲜冰冻血浆及冻结冷沉淀，均可用于生产。

1.1.1.2分离后的血浆应保持无菌，并应及时冰冻保存。自采血到冻结一般在8小时内完成。液体血浆应在4±2℃贮放，贮放时间应不超过小时，最长不得超过12小时。冰冻血浆（-30℃以下）保存期不超过6个月。

1.1.2 对制造工作室、设备及原材料的要求，与《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》中1.1.3～1.1.4项要求相同。

1.2 制造工艺

1.2.1 采用低温乙醇法或冻融法制得冷沉淀，经抽提、吸附、精制，亦可采用经卫生部批准的其他工艺制备，并经卫生部批准的适宜方法进行病毒灭活处理。

1.2.2 分批

同一制造工艺、同一容器混合的制品作为一批，不同滤器和不同机柜冻干的制品分为亚批。

1.2.3 稳定剂及防腐剂

制品内允许加稳定剂，制品应不含防腐剂。

1.2.4除菌过滤及分装

本品应用微孔薄膜过滤，可直接分装无菌的成品瓶内，每瓶装量根据效价及规格确定。

1.2.5 半成品检定

每批半成品应进行效价测定及热原质试验，并按亚批做无菌试验。

1.2.6 冻干

除菌过滤分装的制品经外观检查后立即冻结，并按《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》1。2。5项规定进行冻干，但制品温度不得超过35℃。

1.3 规格

每瓶含人凝血因子Ⅷ的效价可有50、100、200、300、400IU五种，制品的效价应标示在瓶签及包装上。

2 成品检定

2.1抽样

每批制品应抽样作全面质量检定，不同机柜冻干的制品分别抽样做无菌试验和水分测定。

2.2 物理检查

2.2.1 外观

应为乳白色疏松体，无融化迹象。溶解后溶液澄清或轻微乳光，允许有微量细小蛋白颗粒。

2.2.2 真空度

以高频火花真空测定器检测，瓶内应出现蓝紫色辉光。

2.2.3 溶解时间

从冰箱取出的制品应先平衡至25～37℃，然后按瓶签标示量加入适量30～37℃灭菌注射用水，使其每ml含4IU。制品应于30分钟内溶解。

2.3 化学检定

按《生物制品化学检定规程》进行。

2.3.1 水分

水分含量应≤3%（g/g）。

2.3.2pH值

取2.2.3项下溶解在20±2℃测定，pH值应为6.8～7.6。

2.3.3 钠离子测定

取2.2.3 项下溶液测定，钠离子含量应≤160mmol/L。

2.3.4枸橼酸离子测定

取2.2.3项下溶液测定，如加枸橼酸钠作稳定剂，其枸橼酸离子含量应≤25mmol/L。

2.4 效价测定

取2.2.3项下溶液用一步或二步法（见附录）进行测定，每瓶所含人凝血因子Ⅷ的效价应不低于标示量的80%。

2.5 比活性

每mg蛋白质所含人凝血因子Ⅷ的效价应≥0.25IU。

2.6HBsAg检测

用敏感性为1ng/ml以下的试剂盒检测，应为阴性。

2.7 抗HCV检测

用敏感的方法检测，应为阴性。

2.8抗HIV-1及2检测

用敏感的方法检测，应为阴性。

2.9 无菌试验

样品溶解后按《生物制品无菌试验规程》进行。

2.10 安全试验

2.10.1 豚鼠试验

用体重300～400g健康豚鼠2只，每只腹腔注射检品15IU，注射后半小时内动物不应有明显的异常反应，观察7天，动物均健存，每只体重增加者判为合格。如不符合上述要求，用4只豚鼠复试一次，判定标准同前。

2.10.2 小白鼠试验

用体重18～20g小白鼠5只，每只腹腔注射检品1.5IU，半小时内动物不应有明显的异常反应，继续观察7天，动物均健存，每只体重增加者判为合格。如不符合上述要求，用10只小白鼠复试一次，判定标准同前。

2.11 热原质试验

按《生物制品热原质试验规程》进行，注射剂量按家兔体重注射10IU/kg。判定标准按该4.2项要求进行。

2.12 鉴别试验

用免疫双扩散法，仅与抗人的血清产生沉淀线，与抗马、抗牛血清不产生沉淀线。

2.13根据病毒灭活方法，必要时应增加相应的检定项目。

3 保存与效期

应严格保存于10℃以下避光干燥处，运输期间亦应冷藏。效期自效价检定合格之日起为2年。